Г. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецил-сульфата натрия

В настоящее время электрофорез в полиариламидном геле (ПААГ) в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН) [ДСН-ПААГ-электрофорез (SDS-PAGE)] является общепринятым методом определения гомогенности белковых препаратов. Метод основан на свойстве заряженных частиц (молекул) перемещаться под действием электрического поля (см. Белки плазмы крови). Обычно скорость миграции зависит от трёх параметров анализируемых белков: величины молекул, формы молекул и суммарного заряда. Поэтому предварительно белки денатурируют с тем, чтобы скорость миграции зависела только от молекулярной массы. Для этого анализируемую смесь обрабатывают додецилсульфатом натрия [ДСН (SDS)] (C₁₂H₂₅OSO₃Na), который представляет собой детергент с сильно выраженными амфифильными свойствами (см. Гидрофобные взаимодействия). Под действием ДСН олигомерные белки диссоциируют на субъединицы и денатурируют. Развёрнутые полипептидные цепи связывают ДСН (примерно 0,4 г/г белка) и приобретают отрицательный заряд. Для полной денатурации в среду добавляют тиолы, которые расщепляют дисульфидные мостики (1).

Электрофорез проводят в тонком слое полиакриламида (2). После завершения электрофореза, зоны белков выявляют с помощью красителя. В качестве примера на схеме 3 приведена электрофореграмма трёх препаратов: клеточного экстракта, содержащего сотни белков (а); выделенного из экстракта гомогенного белка (б); контрольной смеси белков с известными молекулярными массами (в).

Статьи раздела «Методы выделения и анализа белков»:

• Методы выделения и анализа белков
• A. Высаливание
• Б. Диализ
• B. Гель-фильтрация
• Г. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецил-сульфата натрия

— Следущая статья   |   — Вернуться в раздел