Б. Распределительная хроматография ФТЦ-производных аминокислот

Распределительная хроматография основана на различной полярности разделяемых веществ. Если на инертный носитель нанести малополярную неподвижную фазу, а затем смесь неполярных веществ, то они будут удерживаться носителем за счёт гидрофобного взаимодействия (см. Гидрофобные взаимодействия). Если такую колонку промыть смесью полярных растворителей (подвижной фазой), то компоненты смеси будут перемещаться с различной скоростью в зависимости от их полярности. Вначале будут элюироваться гидрофильные вещества, слабо взаимодействующие с неподвижной фазой, а затем гидрофобные вещества.

В первых вариантах распределительной хроматографии гидрофильной была неподвижная фаза, а гидрофобной — подвижная. Приведённая здесь современная модификация метода носит название обращённо-фазовая хроматография (ОФХ).

Сначала при взаимодействии с фенил-изотиоцианатом получают производные аминокислот (1). ФТЦ-аминокислоты (РТС-аминокислоты) малополярны и благодаря поглощению в УФ-области спектра их можно обнаруживать в элюате фотометрически. В качестве неподвижной фазы используются мелкие частицы силикагеля (диаметром 5 мкм) с привитыми углеводородными цепями (лигандами). Использование мелкодисперсных носителей позволяет повысить качество разделения, однако при этом растёт механическое сопротивление колонки. Поэтому высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) проводят в капиллярах или колонках, выполненных из нержавеющей стали, а элюент подают с помощью насосов высокого давления (2). В качестве элюентов используются системы растворителей с возрастающей концентрацией ацетонитрила (CH3CN). Состав подвижной фазы, а следовательно, и качество разделения (3) оптимизируют с помощью программируемых градиентных смесителей.


Биомолекулы. Аминокислоты / Аминокислотный анализ

Статьи раздела «Аминокислотный анализ»:

Следущая статья   |   — Вернуться в раздел


Introductory Microbiology / As a component of biology, Plant Pathology enjoyed a prestigious position and its applied aspects; plant disease management was an integral part of agroecosystem management. In the era of globalization, our country is progressing very fast in agricultural sector by developing innovative techniques aIntroductory Microbiology
As a component of biology, Plant Pathology enjoyed a prestigious position and its applied aspects; plant disease management was an integral part of ...
Микрокосм. E. coli и новая наука о жизни / Цитата «В начале XX в. учёные, стремясь познать природу жизни, начали исследовать безвредные штаммы E. coli. И кое-кому из них уже в конце первого десятилетия пришлось съездить в Стокгольм за Нобелевскими премиями, присуждёнными за эти работы. Позже новые поколения учёных пытались разобраться в устрМикрокосм. E. coli и новая наука о жизни
Цитата «В начале XX в. учёные, стремясь познать природу жизни, начали исследовать ...
Ферментативная кинетика. Справочник по механизмам реакций / Много лет тому назад под руководством профессора Е. Е. Селькова автором была начата регулярная работа по созданию справочника по ферментативной кинетике. Многие математические формулы были выведены впервые. Читателю предлагается промежуточный итог этой огромной работы. 50 механизмов ферментативных рФерментативная кинетика. Справочник по механизмам реакций
Много лет тому назад под руководством профессора Е. Е. Селькова автором была ...
Прикладная молекулярная биология. Изд.2 / В учебном пособии изложены основы молекулярной биологии, а также направления приложения закономерностей молекулярной биологии для практического использования. Рассмотрены системная организация живого вещества на биосферном и молекулярном уровнях, структурная организация макромолекул, функции биополиПрикладная молекулярная биология. Изд.2
В учебном пособии изложены основы молекулярной биологии, а также направления ...