Г. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецил-сульфата натрия

В настоящее время электрофорез в полиариламидном геле (ПААГ) в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН) [ДСН-ПААГ-электрофорез (SDS-PAGE)] является общепринятым методом определения гомогенности белковых препаратов. Метод основан на свойстве заряженных частиц (молекул) перемещаться под действием электрического поля (см. Белки плазмы крови). Обычно скорость миграции зависит от трёх параметров анализируемых белков: величины молекул, формы молекул и суммарного заряда. Поэтому предварительно белки денатурируют с тем, чтобы скорость миграции зависела только от молекулярной массы. Для этого анализируемую смесь обрабатывают додецилсульфатом натрия [ДСН (SDS)] (C12H25OSO3Na), который представляет собой детергент с сильно выраженными амфифильными свойствами (см. Гидрофобные взаимодействия). Под действием ДСН олигомерные белки диссоциируют на субъединицы и денатурируют. Развёрнутые полипептидные цепи связывают ДСН (примерно 0,4 г/г белка) и приобретают отрицательный заряд. Для полной денатурации в среду добавляют тиолы, которые расщепляют дисульфидные мостики (1).

Электрофорез проводят в тонком слое полиакриламида (2). После завершения электрофореза, зоны белков выявляют с помощью красителя. В качестве примера на схеме 3 приведена электрофореграмма трёх препаратов: клеточного экстракта, содержащего сотни белков (а); выделенного из экстракта гомогенного белка (б); контрольной смеси белков с известными молекулярными массами (в).


Биомолекулы. Пептиды и белки / Методы выделения и анализа белков

Статьи раздела «Методы выделения и анализа белков»:

Следущая статья   |   — Вернуться в раздел


Оплодотворение / Книга представляет собой сводку новейших данных по морфологии и физиологии оплодотворения, где рассматриваются структура яйца и его оболочки, изменения, наступающие при оплодотворении, дыхание и обмен яйца, активность ферментов, вопрос о полиспермии и оплодотворении смесью спермы. Предназначена для Оплодотворение
Книга представляет собой сводку новейших данных по морфологии и физиологии ...
Introductory Microbiology / As a component of biology, Plant Pathology enjoyed a prestigious position and its applied aspects; plant disease management was an integral part of agroecosystem management. In the era of globalization, our country is progressing very fast in agricultural sector by developing innovative techniques aIntroductory Microbiology
As a component of biology, Plant Pathology enjoyed a prestigious position and its applied aspects; plant disease management was an integral part of ...
Physical Properties of Macromolecules / Explains and analyzes polymer physical chemistry research methods and experimental data Taking a fresh approach to polymer physical chemistry, Physical Properties of Macromolecules integrates the two foundations of physical polymer science, theory and practice. It provides the tools to understand poPhysical Properties of Macromolecules
Explains and analyzes polymer physical chemistry research methods and experimental data Taking a fresh approach to polymer physical chemistry, ...
Geobiology: Objectives, Concepts, Perspectives, First Edition / Book DescriptionGeobiology is an exciting and rapidly developing research discipline that opens new perspectives in understanding Earth as a system. To determine and to exploit its possibilities, this promising scientific field will benefit from a discussion of its definition as a research disciplinGeobiology: Objectives, Concepts, Perspectives, First Edition
Book DescriptionGeobiology is an exciting and rapidly developing research discipline that opens new perspectives in understanding Earth as a system. ...