Г. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецил-сульфата натрия

В настоящее время электрофорез в полиариламидном геле (ПААГ) в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН) [ДСН-ПААГ-электрофорез (SDS-PAGE)] является общепринятым методом определения гомогенности белковых препаратов. Метод основан на свойстве заряженных частиц (молекул) перемещаться под действием электрического поля (см. Белки плазмы крови). Обычно скорость миграции зависит от трёх параметров анализируемых белков: величины молекул, формы молекул и суммарного заряда. Поэтому предварительно белки денатурируют с тем, чтобы скорость миграции зависела только от молекулярной массы. Для этого анализируемую смесь обрабатывают додецилсульфатом натрия [ДСН (SDS)] (C12H25OSO3Na), который представляет собой детергент с сильно выраженными амфифильными свойствами (см. Гидрофобные взаимодействия). Под действием ДСН олигомерные белки диссоциируют на субъединицы и денатурируют. Развёрнутые полипептидные цепи связывают ДСН (примерно 0,4 г/г белка) и приобретают отрицательный заряд. Для полной денатурации в среду добавляют тиолы, которые расщепляют дисульфидные мостики (1).

Электрофорез проводят в тонком слое полиакриламида (2). После завершения электрофореза, зоны белков выявляют с помощью красителя. В качестве примера на схеме 3 приведена электрофореграмма трёх препаратов: клеточного экстракта, содержащего сотни белков (а); выделенного из экстракта гомогенного белка (б); контрольной смеси белков с известными молекулярными массами (в).


Биомолекулы. Пептиды и белки / Методы выделения и анализа белков

Статьи раздела «Методы выделения и анализа белков»:

Следущая статья   |   — Вернуться в раздел


Фотосинтез. В 2 томах (комплект) / Книга, написанная в основном американскими авторами, представляет собой фундаментальный труд, который исчерпывающим образом освещает проблему фотосинтеза. В 1-м томе рассматриваются биохимические и биофизические аспекты превращения энергии у растений и бактерий, структура и функция фотосинтетическихФотосинтез. В 2 томах (комплект)
Книга, написанная в основном американскими авторами, представляет собой ...
Иммунология. Терминологический словарь / Впервые в русскоязычной литературе системно изложены и даны толкования более 1 600 используемых в современной иммунологии и иммунопатологии терминов, иммунобиологических процессов и явлений. Описаны молекулы (иммуноглобулины, цитокины, хемокины, белки системы комплемента, рецепторы, CD- и HLA-антигеИммунология. Терминологический словарь
Впервые в русскоязычной литературе системно изложены и даны толкования более 1 600 ...
Molecular Biology of the Cell: The Problems Book / The Problems Book helps students appreciate the ways in which experiments and simple calculations can lead to an understanding of how cells work by introducing the experimental foundation of cell and molecular biology. Each chapter will review key terms, test for understanding basic concepts, and poMolecular Biology of the Cell: The Problems Book
The Problems Book helps students appreciate the ways in which experiments and simple calculations can lead to an understanding of how cells work by ...
Структура и стабильность биологических макромолекул / В книге рассмотрены строение и свойства биополимеров — в основном белков. Такие вопросы, как конформации белков в связи с их физиологическими функциями, влияние нейтральных солей на структуру и конформационную стабильность макромолекул в растворе, сравнение структуры белков в кристаллах и растворах,Структура и стабильность биологических макромолекул
В книге рассмотрены строение и свойства биополимеров — в основном белков. Такие ...