Г. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецил-сульфата натрия

В настоящее время электрофорез в полиариламидном геле (ПААГ) в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН) [ДСН-ПААГ-электрофорез (SDS-PAGE)] является общепринятым методом определения гомогенности белковых препаратов. Метод основан на свойстве заряженных частиц (молекул) перемещаться под действием электрического поля (см. Белки плазмы крови). Обычно скорость миграции зависит от трёх параметров анализируемых белков: величины молекул, формы молекул и суммарного заряда. Поэтому предварительно белки денатурируют с тем, чтобы скорость миграции зависела только от молекулярной массы. Для этого анализируемую смесь обрабатывают додецилсульфатом натрия [ДСН (SDS)] (C12H25OSO3Na), который представляет собой детергент с сильно выраженными амфифильными свойствами (см. Гидрофобные взаимодействия). Под действием ДСН олигомерные белки диссоциируют на субъединицы и денатурируют. Развёрнутые полипептидные цепи связывают ДСН (примерно 0,4 г/г белка) и приобретают отрицательный заряд. Для полной денатурации в среду добавляют тиолы, которые расщепляют дисульфидные мостики (1).

Электрофорез проводят в тонком слое полиакриламида (2). После завершения электрофореза, зоны белков выявляют с помощью красителя. В качестве примера на схеме 3 приведена электрофореграмма трёх препаратов: клеточного экстракта, содержащего сотни белков (а); выделенного из экстракта гомогенного белка (б); контрольной смеси белков с известными молекулярными массами (в).


Биомолекулы. Пептиды и белки / Методы выделения и анализа белков

Статьи раздела «Методы выделения и анализа белков»:

Следущая статья   |   — Вернуться в раздел


Оплодотворение / Книга представляет собой сводку новейших данных по морфологии и физиологии оплодотворения, где рассматриваются структура яйца и его оболочки, изменения, наступающие при оплодотворении, дыхание и обмен яйца, активность ферментов, вопрос о полиспермии и оплодотворении смесью спермы. Предназначена для Оплодотворение
Книга представляет собой сводку новейших данных по морфологии и физиологии ...
Stress — From Molecules to Behavior: A Comprehensive Analysis of the Neurobiology of Stress Responses / This book comprehensively covers the molecular basis of stress responses of the nervous system, providing a unique and fundamental insight into the molecular, physiological and behavioral basis of the stress response of a whole organism. Edited by leading experts in the field and summarizing the latStress — From Molecules to Behavior: A Comprehensive Analysis of the Neurobiology of Stress Responses
This book comprehensively covers the molecular basis of stress responses of the nervous system, providing a unique and fundamental insight into the ...
Кинетика и термодинамика биохимических процессов / В книге систематически излагаются вопросы применения кинетики и термодинамики к решению биохимических и общебиологических проблем. Приводимые в ней многочисленные примеры иллюстрируют этот метод изучения живых организмов и показывают совпадение теоретических результатов с экспериментальными данными.Кинетика и термодинамика биохимических процессов
В книге систематически излагаются вопросы применения кинетики и термодинамики к ...
Handbook of Nanoindentation: With Biological Applications / Broadly divided into two parts, this guide’s first part presents the a’basic sciencea’ of nanoindentation, including the background of contact mechanics underlying indentation technique, and the instrumentation used to gather mechanical data. Both the mechanics background and the instrumentation oveHandbook of Nanoindentation: With Biological Applications
Broadly divided into two parts, this guide’s first part presents the a’basic sciencea’ of nanoindentation, including the background of contact ...