Распределительная хроматография основана на различной полярности разделяемых веществ. Если на инертный носитель нанести малополярную неподвижную фазу, а затем смесь неполярных веществ, то они будут удерживаться носителем за счёт гидрофобного взаимодействия (см. Гидрофобные взаимодействия). Если такую колонку промыть смесью полярных растворителей (подвижной фазой), то компоненты смеси будут перемещаться с различной скоростью в зависимости от их полярности. Вначале будут элюироваться гидрофильные вещества, слабо взаимодействующие с неподвижной фазой, а затем гидрофобные вещества.
В первых вариантах распределительной хроматографии гидрофильной была неподвижная фаза, а гидрофобной — подвижная. Приведённая здесь современная модификация метода носит название обращённо-фазовая хроматография (ОФХ).
Сначала при взаимодействии с фенил-изотиоцианатом получают производные аминокислот (1). ФТЦ-аминокислоты (РТС-аминокислоты) малополярны и благодаря поглощению в УФ-области спектра их можно обнаруживать в элюате фотометрически. В качестве неподвижной фазы используются мелкие частицы силикагеля (диаметром 5 мкм) с привитыми углеводородными цепями (лигандами). Использование мелкодисперсных носителей позволяет повысить качество разделения, однако при этом растёт механическое сопротивление колонки. Поэтому высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) проводят в капиллярах или колонках, выполненных из нержавеющей стали, а элюент подают с помощью насосов высокого давления (2). В качестве элюентов используются системы растворителей с возрастающей концентрацией ацетонитрила (CH3CN). Состав подвижной фазы, а следовательно, и качество разделения (3) оптимизируют с помощью программируемых градиентных смесителей.
В первых вариантах распределительной хроматографии гидрофильной была неподвижная фаза, а гидрофобной — подвижная. Приведённая здесь современная модификация метода носит название обращённо-фазовая хроматография (ОФХ).
Сначала при взаимодействии с фенил-изотиоцианатом получают производные аминокислот (1). ФТЦ-аминокислоты (РТС-аминокислоты) малополярны и благодаря поглощению в УФ-области спектра их можно обнаруживать в элюате фотометрически. В качестве неподвижной фазы используются мелкие частицы силикагеля (диаметром 5 мкм) с привитыми углеводородными цепями (лигандами). Использование мелкодисперсных носителей позволяет повысить качество разделения, однако при этом растёт механическое сопротивление колонки. Поэтому высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) проводят в капиллярах или колонках, выполненных из нержавеющей стали, а элюент подают с помощью насосов высокого давления (2). В качестве элюентов используются системы растворителей с возрастающей концентрацией ацетонитрила (CH3CN). Состав подвижной фазы, а следовательно, и качество разделения (3) оптимизируют с помощью программируемых градиентных смесителей.
Статьи раздела «Аминокислотный анализ»:
- Аминокислотный анализ
- А. Ионообменная хроматография свободных аминокислот
- Б. Распределительная хроматография ФТЦ-производных аминокислот
Структура:
Списки:
Сложность материала:
Величины и единицы:
Книги Список книг
Biomolecular Crystallography: Principles, Practice, and Application to Structural Biology Synthesizing over thirty years of advances into a comprehensive textbook, Biomolecular Crystallography describes the fundamentals, practices, and ...
Защита от биоповреждений, вызываемых грибами Книга посвящена проблеме снижения химической и биологической опасности в сфере ...
Stress — From Molecules to Behavior: A Comprehensive Analysis of the Neurobiology of Stress Responses This book comprehensively covers the molecular basis of stress responses of the nervous system, providing a unique and fundamental insight into the ...
Введение в молекулярную биологию В книге обобщаются современные достижения сравнительно новой отрасли знания, ...