Иммуноанализ — это полуколичественный метод определения содержания веществ, присутствующих в очень низких концентрациях. В принципе иммуноанализом можно определять любые соединения, вызывающие образование антител.
Основой этого метода является «реакция» антиген-антитело, то есть специфическое связывание антитела с определяемым веществом. Из многих разработанных методов иммуноанализа, таких, как радиоиммунный анализ (РИА), хемилюминесцентный иммуноанализ и так далее, здесь рассматривается вариант иммуноферментного анализа (ИФА).
Образцы сыворотки крови, содержащие определяемое вещество, к примеру гормон тироксин, помещаются в лунки планшета для микротитрования (1), на стенках которых сорбированы антитела, способные специфически связывать гормон. Одновременно в инкубационную смесь вносится небольшое количество тироксина, химически связанного с ферментом, так называемый конъюгат (1). Конъюгат и определяемый гормон конкурируют между собой за связывание с ограниченным количеством сорбированных антител. После того как связывание антигенов произошло (2), несвязавшиеся молекулы отмывают. Для определения количества связавшегося конъюгированного антигена в лунки вносят раствор хромогенного субстрата (субстратный буфер) и окрашенные продукты ферментативной реакции (3) определяют фотометрически (4) (см. Ферментативный анализ).
Чем большее количество конъюгата свяжется с антителами, сорбированными на стенках лунки микропланшета, тем выше содержание окрашенного продукта ферментативной реакции. В то же время, чем больше гормона в тестируемой пробе, тем меньше конъюгата будет связываться с антителами. Количественная оценка осуществляется с помощью градуировочной кривой, которую строят по стандартным образцам с известной концентрацией, проводя несколько параллельных измерений.
Основой этого метода является «реакция» антиген-антитело, то есть специфическое связывание антитела с определяемым веществом. Из многих разработанных методов иммуноанализа, таких, как радиоиммунный анализ (РИА), хемилюминесцентный иммуноанализ и так далее, здесь рассматривается вариант иммуноферментного анализа (ИФА).
Образцы сыворотки крови, содержащие определяемое вещество, к примеру гормон тироксин, помещаются в лунки планшета для микротитрования (1), на стенках которых сорбированы антитела, способные специфически связывать гормон. Одновременно в инкубационную смесь вносится небольшое количество тироксина, химически связанного с ферментом, так называемый конъюгат (1). Конъюгат и определяемый гормон конкурируют между собой за связывание с ограниченным количеством сорбированных антител. После того как связывание антигенов произошло (2), несвязавшиеся молекулы отмывают. Для определения количества связавшегося конъюгированного антигена в лунки вносят раствор хромогенного субстрата (субстратный буфер) и окрашенные продукты ферментативной реакции (3) определяют фотометрически (4) (см. Ферментативный анализ).
Чем большее количество конъюгата свяжется с антителами, сорбированными на стенках лунки микропланшета, тем выше содержание окрашенного продукта ферментативной реакции. В то же время, чем больше гормона в тестируемой пробе, тем меньше конъюгата будет связываться с антителами. Количественная оценка осуществляется с помощью градуировочной кривой, которую строят по стандартным образцам с известной концентрацией, проводя несколько параллельных измерений.

Статьи раздела «Моноклональные антитела, иммуноанализ»:
- А. Моноклональные антитела
- Б. Иммуноанализ
Структура:
Списки:
Сложность материала:
Величины и единицы:
Книги Список книг
Внутриклеточная Са2+-зависимая протеолитическая система животных Монография представляет собой обобщающее издание, основанное на анализе ...
Лекции по природоведческой микробиологии Книга основана на курсе лекций, прочитанных в МГУ им. М. В. Ломоносова в 1995-2002 гг. ...
Biomolecular Crystallography: Principles, Practice, and Application to Structural Biology Synthesizing over thirty years of advances into a comprehensive textbook, Biomolecular Crystallography describes the fundamentals, practices, and ...
