Рестриктазы расщепляют ДНК в специфических участках, обычно в палиндромных последовательностях (см. Клонирование ДНК). Когда одно из оснований в такой последовательности изменяется в результате мутации, этот участок перестаёт расщепляться рестриктазами. В то же время мутации могут приводить к образованию новых участков, чувствительных к рестриктазе. В результате соответствующие фрагменты ДНК, полученной от двух генетически не идентичных индивидов, часто образуют рестрикционные фрагменты различной длины. Это явление носит название полиморфизма длин рестрикционных фрагментов ДНК (ПДРФ, англ. restriction fragment length polimorphism, RFLP).
На рис. 1 приведён метод выявления ПДРФ. Прежде всего, ДНК-фрагмент, содержащий исследуемую последовательность, амплифицируют с помощью ПЦР (А). Затем амплифицированный фрагмент гидролизуют подходящей рестриктазой. Фрагменты разделяют гель-электрофорезом, интересующий фрагмент выявляют с помощью специфичного генного зонда (см. Секвенирование ДНК). На рис. 2 приведены результаты применения метода в криминалистике. Рестрикционная карта образца ДНК, выделенной из ткани, найденной на месте преступления, чётко совпадает с пробой, взятой у подозреваемого 2, а не у подозреваемого 1. Для получения такого «генетического отпечатка» достаточно очень малого количества материала, содержащего ДНК. Вторым важным практическим приложением ПДРФ-анализа является выявление генетических мутаций, ведущих к наследственным заболеваниям.
На рис. 1 приведён метод выявления ПДРФ. Прежде всего, ДНК-фрагмент, содержащий исследуемую последовательность, амплифицируют с помощью ПЦР (А). Затем амплифицированный фрагмент гидролизуют подходящей рестриктазой. Фрагменты разделяют гель-электрофорезом, интересующий фрагмент выявляют с помощью специфичного генного зонда (см. Секвенирование ДНК). На рис. 2 приведены результаты применения метода в криминалистике. Рестрикционная карта образца ДНК, выделенной из ткани, найденной на месте преступления, чётко совпадает с пробой, взятой у подозреваемого 2, а не у подозреваемого 1. Для получения такого «генетического отпечатка» достаточно очень малого количества материала, содержащего ДНК. Вторым важным практическим приложением ПДРФ-анализа является выявление генетических мутаций, ведущих к наследственным заболеваниям.
Статьи раздела «Полимеразная цепная реакция»:
- Полимеразная цепная реакция
- А. Полимеразная цепная реакция
- Б. Анализ длины рестрикционных фрагментов
- В. Сверхэкспрессия белков
Структура:
Списки:
Сложность материала:
Величины и единицы:
Книги Список книг
Molecular Biology of the Cell: The Problems Book The Problems Book helps students appreciate the ways in which experiments and simple calculations can lead to an understanding of how cells work by ...
Микрокосм. E. coli и новая наука о жизни Цитата «В начале XX в. учёные, стремясь познать природу жизни, начали исследовать ...
Practical Forensic Microscopy: A Laboratory Manual Forensic Microscopy: A Laboratory Manual will provide the student with a practical overview and understanding of the various microscopes and ...
Металлы, которые всегда с тобой Металлы, находящиеся в незначительных количествах внутри живого организма, ...