Большинство методик в генной инженерии включают выделение определённых фрагментов ДНК (DNA) и последующее их соединение с другими фрагментами для получения новых комбинаций генов. Для этих целей используются ферменты, которые специфически разрезают и вновь сшивают молекулы ДНК. Наиболее важной группой ферментов являются эндонуклеазы рестрикции (рестриктазы), катализирующие специфическое расщепление двунитевой ДНК. Известно большое число рестриктаз. Для их обозначения используются сокращённые названия микроорганизмов-продуцентов. В качестве примера рассмотрим EcoRI — эндонуклеазу, выделенную из Escherichia coli. Подобно многим другим рестриктазам, этот фермент расщепляет ДНК по палиндромной последовательности, то есть короткому сегменту ДНК, в котором обе цепи при считывании в направлении 5′→3′ имеют одинаковую последовательность.
Для EcoR1 это последовательность 5′-GAATTC-3′. Гомодимер EcoR1 расщепляет фосфодиэфирные связи обеих цепей между G и A. Это приводит к образованию комплементарных «липких» концов (ААТТ), которые удерживаются вместе за счёт спаривания оснований. Их, однако, можно легко отделить друг от друга путём небольшого нагревания. При охлаждении липкие концы гибридизуются вновь в правильной ориентации. Места расщепления можно соединить с помощью ДНК-лигазы.
Для EcoR1 это последовательность 5′-GAATTC-3′. Гомодимер EcoR1 расщепляет фосфодиэфирные связи обеих цепей между G и A. Это приводит к образованию комплементарных «липких» концов (ААТТ), которые удерживаются вместе за счёт спаривания оснований. Их, однако, можно легко отделить друг от друга путём небольшого нагревания. При охлаждении липкие концы гибридизуются вновь в правильной ориентации. Места расщепления можно соединить с помощью ДНК-лигазы.
Статьи раздела «Клонирование ДНК»:
- Клонирование ДНК
- А. Эндонуклеазы рестрикции
- Б. Клонирование ДНК
Структура:
Списки:
Сложность материала:
Величины и единицы:
Книги Список книг
Fundamentals of Forensic DNA Typing An introductory text on forensic DNA analysis, written by the foremost expert in the field.
Biomolecular Crystallography: Principles, Practice, and Application to Structural Biology Synthesizing over thirty years of advances into a comprehensive textbook, Biomolecular Crystallography describes the fundamentals, practices, and ...
Handbook of Nanoindentation: With Biological Applications Broadly divided into two parts, this guide’s first part presents the a’basic sciencea’ of nanoindentation, including the background of contact ...