Большинство методик в генной инженерии включают выделение определённых фрагментов ДНК (DNA) и последующее их соединение с другими фрагментами для получения новых комбинаций генов. Для этих целей используются ферменты, которые специфически разрезают и вновь сшивают молекулы ДНК. Наиболее важной группой ферментов являются эндонуклеазы рестрикции (рестриктазы), катализирующие специфическое расщепление двунитевой ДНК. Известно большое число рестриктаз. Для их обозначения используются сокращённые названия микроорганизмов-продуцентов. В качестве примера рассмотрим EcoRI — эндонуклеазу, выделенную из Escherichia coli. Подобно многим другим рестриктазам, этот фермент расщепляет ДНК по палиндромной последовательности, то есть короткому сегменту ДНК, в котором обе цепи при считывании в направлении 5′→3′ имеют одинаковую последовательность.
Для EcoR1 это последовательность 5′-GAATTC-3′. Гомодимер EcoR1 расщепляет фосфодиэфирные связи обеих цепей между G и A. Это приводит к образованию комплементарных «липких» концов (ААТТ), которые удерживаются вместе за счёт спаривания оснований. Их, однако, можно легко отделить друг от друга путём небольшого нагревания. При охлаждении липкие концы гибридизуются вновь в правильной ориентации. Места расщепления можно соединить с помощью ДНК-лигазы.
Для EcoR1 это последовательность 5′-GAATTC-3′. Гомодимер EcoR1 расщепляет фосфодиэфирные связи обеих цепей между G и A. Это приводит к образованию комплементарных «липких» концов (ААТТ), которые удерживаются вместе за счёт спаривания оснований. Их, однако, можно легко отделить друг от друга путём небольшого нагревания. При охлаждении липкие концы гибридизуются вновь в правильной ориентации. Места расщепления можно соединить с помощью ДНК-лигазы.
Статьи раздела «Клонирование ДНК»:
- Клонирование ДНК
- А. Эндонуклеазы рестрикции
- Б. Клонирование ДНК
Структура:
Списки:
Сложность материала:
Величины и единицы:
Книги Список книг
Review of Medical Microbiology and Immunology To put your preparation for USMLE Step 1 and course exams on the fast track, only one resource will do: «Review of Medical Microbiology and ...
Asphaltenes: Chemical Transformation during Hydroprocessing of Heavy Oils (Chemical Industries) During the upgrading of heavy petroleum, asphaltene is the most problematic impurity since it is the main cause of catalyst deactivation and sediments ...
Physical Properties of Macromolecules Explains and analyzes polymer physical chemistry research methods and experimental data Taking a fresh approach to polymer physical chemistry, ...
Структура и стабильность биологических макромолекул В книге рассмотрены строение и свойства биополимеров — в основном белков. Такие ...