Большинство методик в генной инженерии включают выделение определённых фрагментов ДНК (DNA) и последующее их соединение с другими фрагментами для получения новых комбинаций генов. Для этих целей используются ферменты, которые специфически разрезают и вновь сшивают молекулы ДНК. Наиболее важной группой ферментов являются эндонуклеазы рестрикции (рестриктазы), катализирующие специфическое расщепление двунитевой ДНК. Известно большое число рестриктаз. Для их обозначения используются сокращённые названия микроорганизмов-продуцентов. В качестве примера рассмотрим EcoRI — эндонуклеазу, выделенную из Escherichia coli. Подобно многим другим рестриктазам, этот фермент расщепляет ДНК по палиндромной последовательности, то есть короткому сегменту ДНК, в котором обе цепи при считывании в направлении 5′→3′ имеют одинаковую последовательность.
Для EcoR1 это последовательность 5′-GAATTC-3′. Гомодимер EcoR1 расщепляет фосфодиэфирные связи обеих цепей между G и A. Это приводит к образованию комплементарных «липких» концов (ААТТ), которые удерживаются вместе за счёт спаривания оснований. Их, однако, можно легко отделить друг от друга путём небольшого нагревания. При охлаждении липкие концы гибридизуются вновь в правильной ориентации. Места расщепления можно соединить с помощью ДНК-лигазы.
Для EcoR1 это последовательность 5′-GAATTC-3′. Гомодимер EcoR1 расщепляет фосфодиэфирные связи обеих цепей между G и A. Это приводит к образованию комплементарных «липких» концов (ААТТ), которые удерживаются вместе за счёт спаривания оснований. Их, однако, можно легко отделить друг от друга путём небольшого нагревания. При охлаждении липкие концы гибридизуются вновь в правильной ориентации. Места расщепления можно соединить с помощью ДНК-лигазы.

Статьи раздела «Клонирование ДНК»:
- Клонирование ДНК
- А. Эндонуклеазы рестрикции
- Б. Клонирование ДНК
Структура:
Списки:
Сложность материала:
Величины и единицы:
Книги Список книг
Books a la Carte Plus for Microbiology with Diseases by Taxonomy (3rd Edition) The Third Edition of Microbiology with Diseases by Taxonomy is the most cutting-edge microbiology book available, offering unparalleled currency, ...
Cell Biology: With STUDENT CONSULT Online Access A masterful, richly illustrated introduction to the cell biology that you need to know.
Principles of Biomedical Informatics Biomedical informatics (BMI) is an extraordinarily broad discipline. In scale, it spans across genes, cells, tissues, organ systems, individual ...
Role of TCF in body axis formation: Discovery of a Dual Action of XTCF-3 in Xenopus Body Axis Formation A novel role of TCF family in body axis formation. Revolutionary high impact discoveries are described, elucidating the missing link in the Wnt ...