Распределительная хроматография основана на различной полярности разделяемых веществ. Если на инертный носитель нанести малополярную неподвижную фазу, а затем смесь неполярных веществ, то они будут удерживаться носителем за счёт гидрофобного взаимодействия (см. Гидрофобные взаимодействия). Если такую колонку промыть смесью полярных растворителей (подвижной фазой), то компоненты смеси будут перемещаться с различной скоростью в зависимости от их полярности. Вначале будут элюироваться гидрофильные вещества, слабо взаимодействующие с неподвижной фазой, а затем гидрофобные вещества.
В первых вариантах распределительной хроматографии гидрофильной была неподвижная фаза, а гидрофобной — подвижная. Приведённая здесь современная модификация метода носит название обращённо-фазовая хроматография (ОФХ).
Сначала при взаимодействии с фенил-изотиоцианатом получают производные аминокислот (1). ФТЦ-аминокислоты (РТС-аминокислоты) малополярны и благодаря поглощению в УФ-области спектра их можно обнаруживать в элюате фотометрически. В качестве неподвижной фазы используются мелкие частицы силикагеля (диаметром 5 мкм) с привитыми углеводородными цепями (лигандами). Использование мелкодисперсных носителей позволяет повысить качество разделения, однако при этом растёт механическое сопротивление колонки. Поэтому высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) проводят в капиллярах или колонках, выполненных из нержавеющей стали, а элюент подают с помощью насосов высокого давления (2). В качестве элюентов используются системы растворителей с возрастающей концентрацией ацетонитрила (CH3CN). Состав подвижной фазы, а следовательно, и качество разделения (3) оптимизируют с помощью программируемых градиентных смесителей.
В первых вариантах распределительной хроматографии гидрофильной была неподвижная фаза, а гидрофобной — подвижная. Приведённая здесь современная модификация метода носит название обращённо-фазовая хроматография (ОФХ).
Сначала при взаимодействии с фенил-изотиоцианатом получают производные аминокислот (1). ФТЦ-аминокислоты (РТС-аминокислоты) малополярны и благодаря поглощению в УФ-области спектра их можно обнаруживать в элюате фотометрически. В качестве неподвижной фазы используются мелкие частицы силикагеля (диаметром 5 мкм) с привитыми углеводородными цепями (лигандами). Использование мелкодисперсных носителей позволяет повысить качество разделения, однако при этом растёт механическое сопротивление колонки. Поэтому высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) проводят в капиллярах или колонках, выполненных из нержавеющей стали, а элюент подают с помощью насосов высокого давления (2). В качестве элюентов используются системы растворителей с возрастающей концентрацией ацетонитрила (CH3CN). Состав подвижной фазы, а следовательно, и качество разделения (3) оптимизируют с помощью программируемых градиентных смесителей.
Статьи раздела «Аминокислотный анализ»:
- Аминокислотный анализ
- А. Ионообменная хроматография свободных аминокислот
- Б. Распределительная хроматография ФТЦ-производных аминокислот
Структура:
Списки:
Сложность материала:
Величины и единицы:
Книги Список книг
Введение в молекулярную биологию В книге обобщаются современные достижения сравнительно новой отрасли знания, ...
Математические модели морфогенеза Автором предлагаемого курса лекций по математическим моделям морфогенеза ...
Koneman’s Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology Long considered the definitive work in its field, this new edition presents all the principles and practices readers need for a solid grounding in all ...
